質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)詳細(xì)介紹

上海遠(yuǎn)慕專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒，動物血清血漿，標(biāo)準(zhǔn)品對照品，質(zhì)粒載體，質(zhì)粒提取試劑盒，培養(yǎng)基，抗體，化學(xué)試劑，生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材，染色液，其他實(shí)驗(yàn)試劑等，代理多款進(jìn)口（國產(chǎn)）品牌，價(jià)格實(shí)惠，質(zhì)量有保證，洽談！

名稱：質(zhì)粒小量提取試劑盒II型

英文名/型號：Plasmid Mini Kit II(200)

品牌：Omega

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

用途：從小于15ml培養(yǎng)過夜的菌液提取50-70ug高純度質(zhì)粒DNA

為了滿足生物領(lǐng)域日益增加的要求，Omega新開發(fā)的基于磁珠的純化方式，以其高結(jié)合力和高純度的核酸產(chǎn)物等*性，已經(jīng)在歐美市場得到廣泛的接收。Omega的磁珠純化方式，與目前大部分公司采用的硅磁顆粒不同，它采用的是納米磁珠同正離子相藕連而成的微型顆粒，該顆粒的結(jié)合能力是傳統(tǒng)硅磁的10-30倍，因而能大大提高核酸產(chǎn)量和純度，目前該產(chǎn)品處于世界zui的水平。此外，為滿足不同客戶的需求，Omega還開發(fā)了一些成本較低的核酸純化試劑盒，如鹽析法純化血液或組織基因組DNA純化試劑盒，玻璃奶純化試劑盒以及溶液型的RNA抽提試劑盒。

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型，Plasmid Mini Kit II(200)操作步驟：

1.樣本處理收集已培養(yǎng)1216小時(shí)的菌液13ml12000rpm離心1分鐘盡量吸除上清。          注：菌液較多時(shí)可以通過多次重復(fù)離心將菌體收集到1個(gè)離心管中。菌液收集量由菌濃而定收集菌體過多會反而降低裂解效果。 

2.懸浮向菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ用移液器反復(fù)吹打或渦旋振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。 

3.裂解加入250ul溶液Ⅱ于細(xì)菌懸液中溫和地上下顛倒6~8次，使菌體充分裂解，加1管混合1管，確保溶液充分、及時(shí)的混勻。充分裂解后的菌液會變得相對粘稠為防止DNA斷裂避免劇烈混勻操作及裂解時(shí)間過長。 

4.中和加入350ul溶液Ⅲ, 立即溫和上下顛倒6~8次充分混勻，加1管混合1管。此時(shí)會出現(xiàn)白色絮狀沉淀靜置2分鐘12000rpm離心5分鐘可適當(dāng)延長至10min。
注：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻避免產(chǎn)生局部沉淀。若上清液中仍存在微小白色沉淀，可重復(fù)離心后取上清。 

5.吸附小心地將上清液轉(zhuǎn)移至吸附柱中12000rpm離心30~60秒，棄收集管中廢液，然后將吸附柱重新套入廢液收集管中。若上清一次加不完，可重復(fù)操作轉(zhuǎn)移時(shí)不可吸入沉淀，此步很重要。

6.漂洗向吸附柱中加入600ul漂洗液PW，使用前請檢查是否已加入無水乙醇，12000rpm離心30~60秒。 

7.重復(fù)步驟6，棄收集管中廢液。 

8.將吸附柱套于收集管中10000rpm離心2分鐘。 
注：此步驟不可省略，目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液，因?yàn)槠匆褐幸掖嫉臍埩魰绊懞罄m(xù)實(shí)驗(yàn)，酶切，PCR等。 

9.洗脫將吸附柱置于一干凈的1.5ml離心管中向吸附柱膜中央部位懸空滴加50~100ul溶解液TE或滅菌雙蒸水，pH值在7.0-8.5，室溫靜置2~10分鐘，12000rpm離心2分鐘，即得提取質(zhì)粒DNA置-20℃保存。 

Plasmid Mini Kit II(200)注意事項(xiàng):

1.使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。

2.洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)， pH值低于7. 0會降低洗脫效率， DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。

3.如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?10kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養(yǎng)物，同時(shí)按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L時(shí)間，以增加提取效率。

4.DNA濃度及純度檢測： 得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時(shí)間、 操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD 260 處有顯著吸收峰，OD 260 值為 1 相當(dāng)于大約 50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD 260 /OD 280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。

標(biāo)簽：Plasmid Mini Kit II(200)   質(zhì)粒小量提取試劑盒II型    質(zhì)粒小量提取試劑盒